葡人来澳不久，荷兰亦凯觎澳门。1601年(明万历二十九年)，荷兰数次向明政府提出借地通商的要求，均被拒绝。又於1601年和1604年两次进攻澳门，均未成功。
    1622年(明天启二年)，荷兰大举侵澳，出动巴达维亚8艘战舰，并联合舰长苗活的4艘战舰，配备巨炮60门，士兵1000人，由荷兰提督赖臣(Kornelis Reyerszoon)统率，於6月10日出发，直奔澳门。
    6月21日，荷舰抵澳门海面。当时澳门守备力量仅50名火枪兵，100多名能执武器的土生葡人和叁座配备不全的炮台。
    6月24日破晓，荷兰军舰猛轰嘉思栏炮台，炮台守军全力回击，当即击毁一艘。赖臣即率800名精锐部队在劏狗环一带登陆，葡军凭藉新挖战壕向荷军反击，赖臣腹部中弹返回，命卢芬(Hans　Ruffijn)代他指挥。荷军在卢芬上校的指挥下很快占领龙环村、龙田村一线，被大龙泉，二龙泉汇合的坑水阻挡。葡方的伯多禄炮台发炮轰击，命中荷军火药车，使荷军死伤惨重。
    这时，澳葡中日贸易船队司令萨门托(Lobo Sarmento de　Carvalho)也亲临前线，并发出反攻命令，葡军、市民、修道士及黑奴们一起出击，特别是黑奴作战勇敢，奋不顾身，当场击毙卢芬，荷军全面崩溃。是役，荷军死136人，伤126人，其中11名校级军官，死伤的日本人和印尼人也达数百人，还有一名上校及一批士兵被俘。葡方伤亡极轻。澳门葡军获得了完全的胜利。
    为了纪念这一空前大捷，澳葡当局将6月24日定为澳门城市日。
    “玛丽亚二世”号巡洋舰爆炸事件
    1850年(道光叁十年)，葡萄牙力图仿效英国侵略者，以武力来迫使清政府承认澳门为葡萄牙的殖民地。特任海军上校官也，即库尼亚(pedrO Alexandrino da Cunha)为澳门总督，派遣巡洋舰“玛丽亚二世”(D.Maria II)号及2艘海防舰前往澳门，加强军事力量。10月29日，为了庆祝葡萄牙女王的诞辰，装饰华丽的“玛丽亚二世”号巡洋舰鸣放礼炮，意外发生爆炸，舰船炸毁沉没，炸死船长及船员191人，还炸死约40名在船上观礼的中国人。这一突发事件，使澳葡当局的殖民扩张计划和野心遭到打击。